高雅人妻被迫沦为玩物,久久久精品人妻一区二区三区四,中文精品久久久久国产网址,狼人无码精华AV午夜精品

技術(shù)文章您的位置:網(wǎng)站首頁 >技術(shù)文章>ibidi活細(xì)胞共聚焦利器

ibidi活細(xì)胞共聚焦利器

更新時間:2023-08-28   點擊次數(shù):997次
ibidi活細(xì)胞共聚焦利器
35mm共聚焦皿
高質(zhì)量成像



激光共聚焦顯微鏡可以觀察到細(xì)胞內(nèi)已經(jīng)標(biāo)記好的蛋白質(zhì)和分子,為生物學(xué)研究提供了更直觀的觀測方法。如今,激光共聚焦成像已經(jīng)是一個非常常規(guī)的實驗操作,廣泛應(yīng)用于生物學(xué)各個研究領(lǐng)域中。


在細(xì)胞實驗中,如果要進(jìn)行一次激光共聚焦成像,除了要知道相關(guān)的顯微鏡參數(shù)設(shè)置和操作以外,樣品的準(zhǔn)備也是非常重要的一個環(huán)節(jié)。



傳統(tǒng)方法

由于激光共聚焦實驗對觀測耗材的底部有著比較高的要求,普通的培養(yǎng)皿,培養(yǎng)板或者培養(yǎng)瓶都不能直接用于激光共聚焦成像。


1.比較常用的是使用170μm左右厚度的蓋玻片作為激光共聚焦成像的細(xì)胞載體。但是使用蓋玻片,在實驗操作上是非常麻煩的,如果買的是國產(chǎn)的蓋玻片,首先要做的一步是將蓋玻片清洗并且烘干滅菌,才能開始使用。


2.進(jìn)口的細(xì)胞爬片,雖然不需要清洗,但是還是需要進(jìn)行包被才能讓細(xì)胞正常貼壁生長。通常是將處理好爬片直接放在多孔板中,然后鋪細(xì)胞,熒光染色后,再用鑷子將爬片拿出,反過來放在滴有封片劑(甘油配置)的載玻片上,再進(jìn)行成像。如圖1所示:

圖片

圖1:使用蓋玻片和細(xì)胞爬片的做免疫熒光方法示意圖

操作流程:

1.蓋玻片需用濃硫酸浸泡過夜,第二天用自來水沖洗20遍,置于無水乙醇中6小時,后用三蒸水沖洗3遍,再放在飯盒或玻璃培養(yǎng)皿中烘干,消毒,再烘干后放入超凈臺備用。

2.準(zhǔn)備好的蓋玻片或者專業(yè)的細(xì)胞爬片需要根據(jù)細(xì)胞的貼壁情況使用多聚賴氨酸等蛋白包被。

3.培養(yǎng)板中放置爬片非常有技巧,要將爬片與培養(yǎng)板底部緊密貼合,這樣才能避免長成雙層細(xì)胞。

4.常規(guī)免疫熒光操作后,取出爬片。準(zhǔn)備載玻片一張,在中間滴加適量的封片劑(甘油配置),將蓋玻片或爬片翻過來,蓋在封片劑上,再用指甲油封片進(jìn)行成像。

5.在激光共聚焦成像之前,盡量用熒光顯微鏡檢查一下細(xì)胞狀態(tài)和成像效果,再去做激光共聚焦,畢竟做一次激光共聚焦的成像也不便宜的。



ibidi無需爬片的簡便方法

這里要介紹ibidi的簡便方法,大大簡化了樣品準(zhǔn)備流程,需要用到專為共聚焦實驗設(shè)計的共聚焦培養(yǎng)皿,這里以德國ibidi的共聚焦培養(yǎng)皿為例(ibidi 81156,ibiTreat底部處理)進(jìn)行說明。共聚焦培養(yǎng)皿的底部是polymer聚合物材質(zhì),具有親水表面,讓大多數(shù)種類的細(xì)胞都可以直接貼壁,無需另外進(jìn)行包被;同時,它們的底部符合蓋玻片標(biāo)準(zhǔn)——厚度僅為180μm,在折射率,阿貝系數(shù)上,它們的性能和標(biāo)準(zhǔn)爬片一致,再加上極低的自發(fā)熒光和細(xì)胞可以直接貼壁的特性,使它們成為共聚焦成像的專用培養(yǎng)皿。


所有的操作都在培養(yǎng)皿中進(jìn)行,不再需要鑷子以及繁瑣的清洗,滅菌,包被程序(流程如圖2所示)

圖片

圖片

圖2:共聚焦專用培養(yǎng)皿的準(zhǔn)備樣品流程,可以直接進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)-染色-成像操作(圖中使用的產(chǎn)品為ibidi 81156共聚焦培養(yǎng)皿)


操作流程:

1.在超凈臺中打開無菌包裝的共聚焦專用培養(yǎng)皿,取出培養(yǎng)皿,加入細(xì)胞懸液,蓋上皿蓋,放入培養(yǎng)箱中靜置,等待細(xì)胞貼壁。常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng),待細(xì)胞長置合適密度再取出,進(jìn)行免疫熒光染色。

2.吸出培養(yǎng)基,以PBS清洗細(xì)胞,再用2%的多聚甲醛PBS溶液固定細(xì)胞。

3.20分鐘后,吸出固定液,加入0.1%Triton X-100

4.10分鐘后,吸出Triton,清洗細(xì)胞后加入BSA封閉。

5.加入抗體熒光染色后,吸出所有試劑,加入封片劑,可以開始共聚焦顯微成像。

使用共聚焦培養(yǎng)皿還有個好處:往往一個共聚焦掃描成像持續(xù)時間很長,培養(yǎng)皿中的液體非常容易揮發(fā),共聚焦培養(yǎng)皿有皿蓋,可以減少揮發(fā);如上述提到的ibidi共聚焦培養(yǎng)皿,有個巧妙的鎖扣設(shè)計,可以扣緊培養(yǎng)皿,確保在共聚焦成像的過程中,皿中的液體不會揮發(fā)(如圖3)。

圖片

圖3:ibidi共聚焦培養(yǎng)皿的鎖扣設(shè)計


圖片



網(wǎng)站首頁 關(guān)于我們 新聞中心 產(chǎn)品中心 聯(lián)系我們
備案號:浙ICP備14014839號-1   GoogleSitemap   技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng) 管理登陸
©2024  衢州新芝生物科技有限公司(www.jsszzy.com) 版權(quán)所有 總訪問量:344427

浙公網(wǎng)安備 33080202000501號

69丰满少妇AV无码区| 精品亚洲一区二区三区在线观看| 午夜福利电影| 欧美丰满熟妇乱XXXXX图片| 女人与公拘交酡全过程| 午夜精品久久久久久久99热| 10000拍拍18勿入免费看| 亚洲AV无码成人片在线观| 真实国产老熟女粗口对白| 风韵诱人的岳欲仙欲死| 97久久国产亚洲精品超碰热| 女性私密粉嫩部位| 免费看影视播放器下载| 粗大的内捧猛烈进出的视频| 老头边吃奶边挵进去呻吟| 午夜精品久久久久久毛片| 18禁黄网站禁片免费观看不卡| 中文无码AV一区二区三区| 20岁自慰喷出白浆| 两根撑到极致哭着求饶H| 年轻丰满的继牳4伦理| 变态抽搐顶弄H| 成人性做爰AAA片免费看曹查理 | 欧美AV噜噜狠狠网址蜜桃| 久草视频新免费| CHINESE猛男自慰GV网站| 亚洲乱色熟女一区二区三区蜜臀 | 无码少妇精品一区二区免费动态| 最近日本MV字幕免费观看| 久久久精品| 人人爽人人爽人人片AV| 无人视频在线观看免费播放| 国产免国产免费| 国产高潮国产高潮久久久久久| 天天狠天天透天干天天怕∴| 黑人与日本少妇JAPANESE| 强 暴 疼 哭 处 女| 日本奶水MILKJAPAN挤奶| 成人无遮挡18禁免费视频| 腿再张大一点就可以吃到扇贝了 | 天干天干天啪啪夜爽爽AV|